中文名称 |
通透剂(含Triton X-100,弱) |
英文名称 |
Permeabilization Buffer with Triton X-100 |
通透剂也叫破膜剂、通透液等。通常可以通过使用有机溶剂例如甲醇、丙酮等,或者使用去垢剂例如 Triton X-100、Saponin 等来实现对于细胞膜的通透。
甲醇或丙酮等有机溶剂,一方面可以溶解细胞膜和核膜从而充分暴露细胞浆和细胞核中的目的蛋白等,另一方面也可以使细胞内的蛋白变性起到固定的作用。其优点是操作比较简单,一步处理可以同时实现固定和通透,缺点是膜蛋白也会被溶解掉并且有些蛋白变性后不利于后续的检测,因此有机溶剂使用相对较少,仅用于一些要求比较粗糙的检测。
TritonX-100 是常用的通透试剂,可以通透细胞膜和核膜,作用原理是非特异性地溶解细胞膜,缺点是不利于膜蛋白的检测,但当使用多聚甲醛进行交联和固定后,相当一部分膜蛋白会被交联固定,从而不会被 Triton X-100 溶解,因此后续仍然能检测到。
Saponin 可以特异性地溶解细胞膜中的胆固醇,从而实现在细胞膜上选择性地打孔,其优点是适合于细胞膜蛋白的检测,特别适合通过流式细胞仪检测细胞膜上的标志性蛋白,缺点是对于一些胆固醇含量低的细胞通透效果差,通透效果弱于 Triton X-100 和有机溶剂,并且不能通透胆固醇含量很低的核膜和线粒体膜。
对于凝集素(lectin)的检测,含 Triton X-100 等非特异性去垢剂的通透液的效果显著优于主要含 Saponin 的通透液。